W losowaniu biorą udział 64 kluby:
  – 16 klubów z PKO Ekstraklasy;
 – 18 klubów z Fortuna 1 Ligi;
 – 10 klubów z II ligi (bez beniaminków i drużyn z miejsc 11-18 z sezonu 2018/2019);
 – 4 zwycięzców rundy wstępnej (drużyny II ligi z miejsc 11-18 z sezonu 2018/2019 po rozegraniu 1 meczu);
 – 16 zdobywców Pucharu Polski w WZPN w sezonie 2018/2019.
 
Kluby będą podzielone na dwa koszyki. W pierwszym znajdą się 4 kluby – uczestnicy Ligi Mistrzów i Ligi Europy w sezonie 2019/2020 – Piast Gliwice, Legia Warszawa, Lechia Gdańsk i Cracovia. W drugim koszyku będzie pozostałych 60 klubów.
 

W pierwszej kolejności do 4 klubów z pierwszego koszyka dolosowani zostaną przeciwnicy z drugiego koszyka. Następnie losowane będę kolejne pary, używając kul tylko z drugiego koszyka.
 
Gospodarzami meczów 1/32 finału Totolotek Pucharu Polski są drużyny występujące w niższej klasie rozgrywkowej. W przypadku drużyn występujących w tej samej klasie rozgrywkowej, gospodarzami są drużyny, które podczas losowania danej pary zostały wylosowane jako pierwsze. Jeśli do klubu z pierwszego koszyka zostanie dolosowany klub PKO Ekstraklasy z drugiego koszyka, to gospodarzem jest klub z pierwszego koszyka.

Zobacz transmisję losowania 1/32 finału Totolotek Pucharu Polski:

.